Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 細(xì)胞增殖與活性檢測試劑盒
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貨號
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35001
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存儲條件
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建議在低于-15℃溫度下冷凍保存
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規(guī)格
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5ml
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Ex (nm)
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Em (nm)
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分子量
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600.47
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溶劑
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Water
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產(chǎn)品詳細(xì)介紹
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簡要概述
Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 細(xì)胞增殖與活性檢測試劑盒是百螢生物生產(chǎn)的一種基于 SST-8 的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。其主要成分為水溶性四唑鹽 SST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，SST-8 是一種類似于 MTT 的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜（formazan，參考圖1)。SST-8 被細(xì)胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的甲臜能夠直接溶解在培養(yǎng)基中。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供*上等的熒光探針。
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CCK-8 細(xì)胞增殖與活性檢測的專家
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CCK-8 常見問題詳解
產(chǎn)品特點
本試劑盒提供了一種靈敏度高，操作簡便，使用**的細(xì)胞增殖與活性檢測方法。與傳統(tǒng)的 MTT 實驗相比具有明顯的優(yōu)勢：
1.MTT實驗生成的甲臜不是水溶性的，需要使用 DMSO 等有機溶劑溶解；而本方法產(chǎn)生的甲臜是水溶性的，不僅省去了溶解步驟，更因此而減少了該操作步驟帶來的誤差。
2.與 MTT 方法相比，本方法線性范圍更寬，靈敏度更高。
3.本方法對細(xì)胞無毒性，可以多次測定，選取*佳測定時間。
4.本方法所用試劑在培養(yǎng)基中比 MTT 更加穩(wěn)定，實驗結(jié)果重復(fù)性好。
5.MTT 具有毒性，同時其生成的甲臜需要有機溶劑溶解，會對操作人員身體造成危害。本試劑無毒，使用中無需有機溶劑，操作更加**。
6.本試劑盒在 4°C 避光可長期保存，使用無需配制，即開即用。
本試劑盒可以用于生物活性因子的活性檢測，抗腫瘤**的篩選，細(xì)胞增殖的測定，細(xì)胞毒性檢測以及藥敏等與細(xì)胞活性和增殖相關(guān)的實驗。本試劑盒使用方便，試劑盒包含一管已經(jīng)配制好的含有 SST-8 的 CCK-8 溶液，即開即用，無需其他準(zhǔn)備步驟。檢測過程也無需采用額外的步驟去溶解甲臜，可直接使用 96 孔板或者 384 孔板在酶標(biāo)儀上檢測，適合大規(guī)模，高通量的樣品檢測。
產(chǎn)品說明書
實驗方案
1.在96 孔板中配置100μL的細(xì)胞懸液（通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100μL2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100μL5000個細(xì)胞。具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等因素決定)。按照實驗需要，進(jìn)行培養(yǎng)（在37°C，5%CO2的條件下）預(yù)培養(yǎng)24 小時。
2.向培養(yǎng)板加入1-10μL 不同濃度的待測**刺激。
3.將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間（例如：6、12、24 或48 小時）。
4.每孔加入10μLCCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD 值的讀數(shù)）。如果起始的培養(yǎng)體積為200μL，則需加入20μLCCK-8溶液，其它情況以此類推。可以用加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對照。如果擔(dān)心所使用的**會干擾檢測，需設(shè)置加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液、**和CCK-8溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對照。
5.在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育1-4小時，對于大多數(shù)情況孵育1小時就可以了。時間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實驗情況而定，初次實驗時可以在0.5、1、2和4小時后分別用酶標(biāo)儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續(xù)實驗。
6.用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度，如無450nm濾光片，可以使用420-480nm的濾光片?？梢允褂么笥?00nm的波長，例如650nm，作為參考波長進(jìn)行雙波長測定。
7.如果暫時不測定OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10 μL 0.1M 的HCL 溶液或者1% w/v SDS 溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。
注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉**影響。當(dāng)然**影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入**后的空白吸收即可。
注意事項：
1.由于使用96孔板進(jìn)行檢測，如果細(xì)胞培養(yǎng)時間較長，一定要注意蒸發(fā)的問題。一方面，由于96孔板周圍一圈*容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS，水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。
2.CCK-8檢測細(xì)胞活性的原理是通過檢測活細(xì)胞脫氫酶催化的反應(yīng)。任何待測體系中存在還原劑，例如一些抗氧化劑會干擾檢測，需設(shè)法去除。
3.建議先做幾個孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時間。
4.建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。加入CCK 試劑時，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基液面下加樣，容易產(chǎn)生氣泡，會干擾OD 值讀數(shù)。
5.當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96 孔板時，貼壁細(xì)胞的*小接種量至少為1,000 個/孔 (100 μL培養(yǎng)基)。檢測白細(xì)胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 (100 μL培養(yǎng)基)，且培養(yǎng)時間長一些。如果要使用24 孔板或6 孔板實驗，請先計算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液。
6.加入CCK -8溶液時，如果細(xì)胞培養(yǎng)時間較長，培養(yǎng)基顏色已變化或pH值變化。建議換用新鮮的培養(yǎng)基。
7.如果沒有450nm 的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm 之間的濾光片，但是450nm 濾光片的檢測靈敏度*高。
8.酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。
9.為了您的**和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。