Amplite?人載脂蛋白B（ApoB）試劑盒*針對ELISAPro自動ELISA處理進行了優(yōu)化*
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貨號
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V101060
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存儲條件
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Multiple
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規(guī)格
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96 Tests
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價格
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Ex (nm)
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Em (nm)
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分子量
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溶劑
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產(chǎn)品詳細介紹
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簡要概述
Mabtech的經(jīng)過仔細驗證的ELISAPRO試劑盒提供了所有必需的試劑，以方便，可靠，特異的方式方便地定量測定血清，血漿和細胞培養(yǎng)上清液中的分析物。
ELISA測定原理
ELISAPRO試劑盒隨附有預(yù)先涂有單克隆抗體（mAb）。樣品中的分析物被包被的mAb捕獲，并被生物素化的檢測mAb和鏈霉親和素-HRP（SA-HRP）檢測。注：TMB底物的添加將導(dǎo)致底物出現(xiàn)顏色。用硫酸終止反應(yīng)，并且可以使用ELISA板酶標儀定量光密度。通過與平行分析的ELISA標準品的系列稀釋液比較來確定分析物的濃度。
血清和血漿樣品分析
ELISAPRO試劑盒包括Apo ELISA緩沖液，一種可防止假陽性信號的緩沖液。緩沖液可阻止嗜異性抗體交聯(lián)測定抗體。嗜異性抗體通常存在于人血清/血漿中，也可以存在于其他物種中。緩沖液已使用來自健康人類獻血者的血清/血漿樣品進行了驗證。
所需材料
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酶標儀可在450 nm讀取
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ELISA平板清洗器；自動或手動（例如，多移液管或噴射瓶）、精密移液管，吸頭和量筒
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用于標準和樣品稀釋的試管
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蒸餾水或去離子水
**信息
Stop溶液0.18 M H2SO4（<1％）對眼睛和皮膚有刺激性，應(yīng)小心處理。由于不知道暴露的影響，因此應(yīng)仔細處理該標準。溶液中的緩沖液和試劑含有防腐劑Kathon CG（0.002％），這是一種潛在的過敏原，可能通過皮膚接觸引起過敏。人和動物樣品應(yīng)被視為潛在危險的生物材料。所有材料應(yīng)按照當?shù)胤ㄒ?guī)進行處理。有關(guān)更多信息，請查閱我們網(wǎng)站上的《**數(shù)據(jù)表》。
制備
在開始測定之前，讓板和測定試劑達到室溫（TMB底物除外，*好使用冷底物）。
計劃板布局，使其一式兩份，包括標準曲線，樣品和測定背景對照。每孔的體積不應(yīng)超過100μl。
產(chǎn)品說明書
樣品實驗方案
儲備溶液配制
1.洗滌緩沖液
將50 ml洗滌緩沖液濃縮液添加到950 ml蒸餾水或去離子水中（足以完成1個板的所有洗滌步驟）。如果在20倍濃縮物中形成了晶體，則將其升至室溫并輕輕混合以溶解。
2. Apo ELISA緩沖液
用蒸餾水或去離子水將Apo ELISA緩沖液濃縮液稀釋5倍，以制備所需體積的Apo ELISA緩沖液。對于每個板，將30 ml Apo ELISA緩沖液濃縮液添加到120 ml水中。
3.樣品
所有樣品均應(yīng)在Apo ELISA緩沖液中稀釋至少2倍。除去可見的沉淀物并在聚丙烯管/板中稀釋，應(yīng)在樣品之前添加緩沖液。高度溶血和高血脂的樣品可能會導(dǎo)致定量結(jié)果不準確。為防止不同的LDL粒徑干擾，所有血清/血漿來源的樣品均應(yīng)在Triton X-100緩沖液中稀釋2倍，然后渦旋振蕩5秒鐘。Triton X稀釋對于細胞系產(chǎn)生的樣品不是必需的，并且不會干擾其他載脂蛋白的分析。避免凍融循環(huán)，因為它會導(dǎo)致信號降低。
4.人血清/血漿稀釋指南
根據(jù)對空腹健康受試者的反復(fù)分析，我們建議稀釋系數(shù)為5000X。**的移液非常重要，在稀釋步驟之間更換吸頭，并使用新鮮制成的稀釋液。試劑的數(shù)量足以重復(fù)使用。
5. ELISA標準
apoB標準品是由50％甘油穩(wěn)定的純化LDL。濃度為125μg/ ml。無需分裝標準液，因為高含量的甘油可使標準液保持液態(tài)。儲存在-20°C。
6.編制標準曲線
如圖所示，稀釋標準儲備溶液以創(chuàng)建標準曲線。試劑的數(shù)量足以重復(fù)使用。*后一個樣品瓶用作測定背景對照，即應(yīng)省略標準液。在使用30分鐘內(nèi)準備標準曲線。
工作溶液配制
1.檢測抗體
使用后15分鐘內(nèi)，將檢測抗體在Apo ELISA緩沖液中稀釋至1μg/ ml的濃度。對于每個板，在12 ml Apo ELISA緩沖液中稀釋12μl檢測抗體。
2.鏈霉親和素
在使用后的15分鐘內(nèi)，將抗生蛋白鏈菌素-HRP用抗生蛋白鏈菌素-HRP稀釋劑稀釋1000倍。對于每塊板，在12 ml的鏈霉親和素-HRP稀釋液中稀釋12μl的鏈霉親和素-HRP。
操作步驟
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用洗滌緩沖液（300μl/孔）洗滌板5次。*后一次洗滌后，將其倒置并用吸水紙吸水。然后立即進行下一步。
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添加樣品（至少稀釋2倍），標準液和測定背景對照（100μl/孔）。敲擊板混合。用粘性板蓋覆蓋板，并在室溫下孵育2小時。
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如上所述清洗板。
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添加檢測抗體（100ul/孔）。蓋好板并在室溫下孵育1小時。
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如上所述清洗板。
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加入抗生蛋白鏈菌素-HRP（100μl/孔）。蓋好板并在室溫下孵育1小時。
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如上所述清洗板。
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添加TMB底物（100ul/孔）。在避開直射光的室溫下孵育15分鐘。
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如上所述清洗板。
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在15分鐘內(nèi)測量450 nm處的吸光度。如果可能，請使用能夠減去570至650 nm參考波長的酶標儀。