Amplite?人載脂蛋白B（ApoB）試劑盒*針對(duì)ALP ELISA開(kāi)發(fā)進(jìn)行了優(yōu)化*

用于定量測(cè)定血清/血漿樣品和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的猴載脂蛋白B（apoB）。請(qǐng)注意，洗滌，封閉和孵育緩沖液應(yīng)包含清潔劑。吐溫20，Triton X-100或NP40的使用濃度為0.05-0.5％。在封閉緩沖液和孵育緩沖液中，建議使用0.1％BSA。

血清/血漿樣品：為防止不同的LDL粒徑干擾，血清/血漿樣品應(yīng)使用Triton X-100處理。用1％Triton X將樣品稀釋2倍，然后渦旋5秒鐘。對(duì)于apoB標(biāo)準(zhǔn)品或細(xì)胞系產(chǎn)生的樣品，不需要Triton X處理。分析人血清/血漿樣品時(shí)，建議使用Apo ELISA緩沖液稀釋樣品，標(biāo)準(zhǔn)品和檢測(cè)抗體。該緩沖液可防止可能由于人血漿和血清中常見(jiàn)的嗜異性抗體的干擾而引起的假陽(yáng)性讀數(shù)。Apo ELISA緩沖液已使用來(lái)自正常健康人類獻(xiàn)血者的血清/血漿進(jìn)行了驗(yàn)證。請(qǐng)注意，尚未評(píng)估來(lái)自患有各種**或其他狀況的人類受試者的樣品中的嗜異性抗體干擾。凍結(jié)和解凍血清/血漿會(huì)降低這些抗體對(duì)apoB的識(shí)別。建議將血清/血漿樣品稀釋5,000x至8,000x。
注意：該試劑盒中未提供Apo ELISA緩沖液。

樣品實(shí)驗(yàn)方案 

操作步驟

1. 通過(guò)添加100μl/孔，用mAb LDL 20/17涂覆高蛋白結(jié)合ELISA板，將其在pH 7.4的PBS中稀釋至2μg/ ml。在4-8°C下孵育過(guò)夜。
2. 用PBS（200μl/孔）洗滌兩次。
3. 通過(guò)添加200μl/孔的PBS和含有0.1％BSA（孵育緩沖液）的0.05％Tween 20來(lái)封閉板。在室溫下孵育1小時(shí)。
4. 用含有0.05％Tween的PBS洗滌五次。
5. apoB標(biāo)準(zhǔn)品是由50％甘油穩(wěn)定的純化LDL。濃度為125μg/ ml。對(duì)于測(cè)試，請(qǐng)使用標(biāo)準(zhǔn)范圍作為指導(dǎo)來(lái)準(zhǔn)備原液的稀釋液。
6. 加入100μl/孔的樣品或在血清或血漿樣品的孵育緩沖液或Apo ELISA緩沖液中稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液，并在室溫下孵育1-2小時(shí)。請(qǐng)注意上述血清/血漿樣品的特殊注意事項(xiàng)。 
7. 按照步驟4進(jìn)行清洗。
8. 在孵育緩沖液或Apo ELISA緩沖液中以100μl/孔的濃度添加1μg/ ml的mAb LDL 11-生物素用于血清/血漿樣品。在室溫下孵育1小時(shí)。
9. 按照步驟4進(jìn)行清洗。
10. 在孵育緩沖液中以100：1 /孔的比例稀釋1：1000的鏈霉親和素ALP。在室溫下孵育1小時(shí)。
11. 按照步驟4進(jìn)行清洗。
12. 加入100μl/孔的適當(dāng)?shù)孜锶芤?，例如?duì)pNPP。
13. 在合適的顯影時(shí)間后，在ELISA酶標(biāo)儀中測(cè)量光密度（對(duì)于pNPP為405 nm）

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