Amplite?人類載脂蛋白D（ApoD）試劑盒*針對(duì)ELISAPro自動(dòng)ELISA處理進(jìn)行了優(yōu)化*

Mabtech的經(jīng)過仔細(xì)驗(yàn)證的ELISAPRO試劑盒提供了所有必需的試劑，以方便，可靠，特異的方式方便地定量測(cè)定血清，血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的分析物。

ELISAPRO試劑盒隨附有預(yù)先涂有單克隆抗體（mAb）。樣品中的分析物被包被的mAb捕獲，并被生物素化的檢測(cè)mAb和鏈霉親和素-HRP（SA-HRP）檢測(cè)。注：TMB底物的添加將導(dǎo)致底物出現(xiàn)顏色。用硫酸終止反應(yīng)，并且可以使用ELISA板酶標(biāo)儀定量光密度。通過與平行分析的ELISA標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋液比較來確定分析物的濃度。

ELISAPRO試劑盒包括Apo ELISA緩沖液，一種可防止假陽性信號(hào)的緩沖液。緩沖液可阻止嗜異性抗體交聯(lián)測(cè)定抗體。嗜異性抗體通常存在于人血清/血漿中，也可以存在于其他物種中。緩沖液已使用來自健康人類獻(xiàn)血者的血清/血漿樣品進(jìn)行了驗(yàn)證。

1. 酶標(biāo)儀可在450 nm讀取
2. ELISA平板清洗器；自動(dòng)或手動(dòng)（例如，多移液管或噴射瓶）?精密移液管，吸頭和量筒
3. 用于標(biāo)準(zhǔn)和樣品稀釋的試管
4. 蒸餾水或去離子水 

Stop溶液0.18 M H2SO4（<1％）對(duì)眼睛和皮膚有刺激性，應(yīng)小心處理。由于不知道暴露的影響，因此應(yīng)仔細(xì)處理該標(biāo)準(zhǔn)。溶液中的緩沖液和試劑含有防腐劑Kathon CG（0.002％），這是一種潛在的過敏原，可能通過皮膚接觸引起過敏。人和動(dòng)物樣品應(yīng)被視為潛在危險(xiǎn)的生物材料。所有材料應(yīng)按照當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)進(jìn)行處理。有關(guān)更多信息，請(qǐng)查閱我們網(wǎng)站上的《**數(shù)據(jù)表》。

在開始測(cè)定之前，讓板和測(cè)定試劑達(dá)到室溫（TMB底物除外，*好使用冷底物）。
計(jì)劃板布局，使其一式兩份，包括標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣品和測(cè)定背景對(duì)照。每孔的體積不應(yīng)超過100μl。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

儲(chǔ)備溶液配制

將50 ml洗滌緩沖液濃縮液添加到950 ml蒸餾水或去離子水中（足以完成1個(gè)板的所有洗滌步驟）。如果在20倍濃縮物中形成了晶體，則將其升至室溫并輕輕混合以溶解。

用蒸餾水或去離子水將Apo ELISA緩沖液濃縮液稀釋5倍，以制備所需體積的Apo ELISA緩沖液。對(duì)于每個(gè)板，將30 ml Apo ELISA緩沖液濃縮液添加到120 ml水中。

所有樣品均應(yīng)在Apo ELISA緩沖液中稀釋至少2倍。除去可見的沉淀物并在聚丙烯管/板中稀釋，應(yīng)在樣品之前添加緩沖液。高度溶血和高血脂的樣品可能會(huì)導(dǎo)致定量結(jié)果不準(zhǔn)確。含有超出分析標(biāo)準(zhǔn)范圍的高水平分析物的樣品將需要進(jìn)一步稀釋。

根據(jù)對(duì)空腹健康受試者的反復(fù)分析，我們建議稀釋系數(shù)為20,000X。**的移液非常重要，在稀釋步驟之間更換吸頭，并使用新鮮制成的稀釋液。試劑的數(shù)量足以重復(fù)使用。

通過添加230ul標(biāo)準(zhǔn)重構(gòu)緩沖液將ELISA標(biāo)準(zhǔn)液重構(gòu)為2μg/ ml的儲(chǔ)液，請(qǐng)勿攪拌。讓標(biāo)準(zhǔn)液溶解20分鐘。標(biāo)準(zhǔn)液應(yīng)等份保存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

如圖所示，稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液以創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。試劑的數(shù)量足以重復(fù)使用。*后一個(gè)樣品瓶用作測(cè)定背景對(duì)照，即應(yīng)省略標(biāo)準(zhǔn)液。在使用30分鐘內(nèi)準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1. 用洗滌緩沖液（300μl/孔）洗滌板5次。*后一次洗滌后，將其倒置并用吸水紙吸水。然后立即進(jìn)行下一步。
2. 添加樣品（至少稀釋2倍），標(biāo)準(zhǔn)液和測(cè)定背景對(duì)照（100μl/孔）。敲擊板混合。用粘性板蓋覆蓋板，并在室溫下孵育2小時(shí)。
3. 如上所述清洗板。
4. 添加檢測(cè)抗體（100ul/孔）。蓋好板并在室溫下孵育1小時(shí)。
5. 如上所述清洗板。
6. 加入抗生蛋白鏈菌素-HRP（100μl/孔）。蓋好板并在室溫下孵育1小時(shí)。
7. 如上所述清洗板。
8. 添加TMB底物（100ul/孔）。在避開直射光的室溫下孵育15分鐘。
9. 如上所述清洗板。
10. 在15分鐘內(nèi)測(cè)量450 nm處的吸光度。如果可能，請(qǐng)使用能夠減去570至650 nm參考波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀。 

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