Amplite?人載脂蛋白E（ApoE）試劑盒*針對HRP ELISA進(jìn)行了優(yōu)化*

用于定量測定血清/血漿樣品和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的人類載脂蛋白E（apoE）。請注意，洗滌，封閉和孵育緩沖液應(yīng)包含清潔劑。吐溫20，Triton X-100或NP40的使用濃度為0.05-0.5％。在封閉緩沖液和孵育緩沖液中，建議使用0.1％BSA。

血清/血漿樣品：分析人血清/血漿樣品時(shí)，建議使用Apo ELISA緩沖液稀釋樣品，標(biāo)準(zhǔn)品和檢測抗體。該緩沖液可防止可能由于人血漿和血清中常見的嗜異性抗體的干擾而引起的假陽性讀數(shù)。Apo ELISA緩沖液已使用來自正常健康人類獻(xiàn)血者的血清/血漿進(jìn)行了驗(yàn)證。請注意，尚未評估來自患有各種**或其他狀況的人類受試者的樣品中的嗜異性抗體干擾。可以使用含有EDTA，檸檬酸鹽或肝素的血清和血漿樣品。但是，由于蛋白聚糖結(jié)合的apoE的置換，含肝素的樣品會(huì)產(chǎn)生更高的apoE值。載脂蛋白分析所需的樣品的Triton X處理不會(huì)干擾載脂蛋白E分析。
注意：該試劑盒中未提供Apo ELISA緩沖液。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

儲(chǔ)備溶液配制

通過將小瓶4內(nèi)試劑重新溶于含0.5 mM DTT和0.1％BSA的1 ml PBS中來制備apoE標(biāo)準(zhǔn)品，不要攪拌，在室溫下放置20分鐘。這將產(chǎn)生5μg/ ml的儲(chǔ)備溶液，應(yīng)立即使用或以等分試樣的形式儲(chǔ)存在-20°C下以備將來使用。我們建議等分試樣在初次使用后不要重新冷凍。對于測試，請使用標(biāo)準(zhǔn)范圍作為指導(dǎo)來準(zhǔn)備原液的稀釋液。

操作步驟

1. 通過添加100μl/孔，用mAb HDL 110涂覆高蛋白結(jié)合ELISA板，將其在pH 7.4的PBS中稀釋至2μg/ ml。在4-8°C下孵育過夜。
2. 用PBS（200μl/孔）洗滌兩次。
3. 通過添加200μl/孔的PBS和含有0.1％BSA（孵育緩沖液）的0.05％Tween 20來封閉板。在室溫下孵育1小時(shí)。
4. 用含有0.05％Tween的PBS洗滌五次。
5. 通過將小瓶4重新溶于含1％BSA的1 ml PBS中來制備apoA1標(biāo)準(zhǔn)品，不要攪拌，在室溫下放置15分鐘，然后渦旋振蕩3s。得到的儲(chǔ)備液為4μg/ ml，應(yīng)立即使用或以等分試樣的形式儲(chǔ)存在-20°C下，以備將來使用。我們建議等分試樣在初次使用后不要重新冷凍。為了進(jìn)行測試，請使用標(biāo)準(zhǔn)范圍作為指導(dǎo)來準(zhǔn)備原液的稀釋液。
6. 加入100μl/孔的樣品或在血清或血漿樣品的孵育緩沖液或Apo ELISA緩沖液中稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液，并在室溫下孵育1-2小時(shí)。血清/血漿樣品的稀釋建議可在以下網(wǎng)址找到：https：// www。mabtech.com/knowledge-center/apodilution。
7. 按照步驟4進(jìn)行清洗。
8. 在孵育緩沖液或Apo ELISA緩沖液中添加100μl/孔的0.5μg/ ml mAb HDL 44-生物素用于血清/血漿樣品。在室溫下孵育1小時(shí)。
9. 按照步驟4進(jìn)行清洗。
10. 在孵育緩沖液中以100：1 /孔的比例稀釋1：1000的鏈霉親和素HRP。在室溫下孵育1小時(shí)。
11. 按照步驟4進(jìn)行清洗。
12. 加入100μl/孔的適當(dāng)?shù)孜锶芤?，如TMB(#11012)。
13.  在適當(dāng)時(shí)間的顯影后，在ELISA讀數(shù)器中測量光密度。 

產(chǎn)品留言

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