用于定量測(cè)定血清/血漿樣品和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的人類載脂蛋白A1（apoA1）。請(qǐng)注意，洗滌，封閉和孵育緩沖液應(yīng)包含清潔劑。吐溫20，Triton X-100或NP40的使用濃度為0.05-0.5％。在封閉緩沖液和孵育緩沖液中，建議使用0.1％BSA，而不要使用牛血清，因?yàn)镠DL 44也可以結(jié)合牛apoA1。

血清/血漿樣品：分析人血清/血漿樣品時(shí)，建議使用Apo ELISA緩沖液稀釋樣品，標(biāo)準(zhǔn)品和檢測(cè)抗體。該緩沖液可防止可能由于人血漿和血清中常見(jiàn)的嗜異性抗體的干擾而引起的假陽(yáng)性讀數(shù)。apoB分析所必需的樣品的Triton X處理不會(huì)干擾apoA1分析。建議將血清/血漿樣品稀釋150,000x至200,000x，請(qǐng)參見(jiàn)https://www.mabtech.com/knowledge-center/apodilution的稀釋指南。避免重復(fù)凍融循環(huán)，不要將樣品保存在-20°C下。儲(chǔ)存在-20°C的樣品會(huì)產(chǎn)生錯(cuò)誤的高apoA1值。
注意：該試劑盒中未提供Apo ELISA緩沖液。

試劑：抗體是在含有疊氮化鈉（0.02％）的無(wú)菌過(guò)濾（0.2μm）PBS中提供的。鏈霉親和素-ALP用0.1M Tris緩沖液和0.002％Kathon CG提供。
標(biāo)準(zhǔn)范圍：0.6-40 ng / ml

樣品實(shí)驗(yàn)方案

儲(chǔ)備溶液配制

通過(guò)將小瓶4內(nèi)試劑重新溶于含1％BSA的1 ml PBS中來(lái)制備apoA1標(biāo)準(zhǔn)品，不要攪拌，在室溫下放置15分鐘，然后渦旋振蕩3s。得到的儲(chǔ)備液為4μg/ ml，應(yīng)立即使用或以等分試樣的形式儲(chǔ)存在-20°C下，以備將來(lái)使用。我們建議等分試樣在初次使用后不要重新冷凍。為了進(jìn)行測(cè)試，請(qǐng)使用標(biāo)準(zhǔn)范圍作為指導(dǎo)來(lái)準(zhǔn)備原液的稀釋液。

操作步驟

1. 通過(guò)添加100μl/孔，用mAb HDL 110涂覆高蛋白結(jié)合ELISA板，將其在pH 7.4的PBS中稀釋至2μg/ ml。在4-8°C下孵育過(guò)夜。
2. 用PBS（200μl/孔）洗滌兩次。
3. 通過(guò)添加200μl/孔的PBS和含有0.1％BSA（孵育緩沖液）的0.05％Tween 20來(lái)封閉板。在室溫下孵育1小時(shí)。
4. 用含有0.05％Tween的PBS洗滌五次。
5. 通過(guò)將小瓶4重新溶于含1％BSA的1 ml PBS中來(lái)制備apoA1標(biāo)準(zhǔn)品，不要攪拌，在室溫下放置15分鐘，然后渦旋振蕩3s。得到的儲(chǔ)備液為4μg/ ml，應(yīng)立即使用或以等分試樣的形式儲(chǔ)存在-20°C下，以備將來(lái)使用。我們建議等分試樣在初次使用后不要重新冷凍。為了進(jìn)行測(cè)試，請(qǐng)使用標(biāo)準(zhǔn)范圍作為指導(dǎo)來(lái)準(zhǔn)備原液的稀釋液。
6. 加入100μl/孔的樣品或在血清或血漿樣品的孵育緩沖液或Apo ELISA緩沖液中稀釋的標(biāo)準(zhǔn)液，并在室溫下孵育1-2小時(shí)。血清/血漿樣品的稀釋建議可在以下網(wǎng)址找到：https：// www。mabtech.com/knowledge-center/apodilution。
7. 按照步驟4進(jìn)行清洗。
8. 在孵育緩沖液或Apo ELISA緩沖液中添加100μl/孔的0.5μg/ ml mAb HDL 44-生物素用于血清/血漿樣品。在室溫下孵育1小時(shí)。
9. 按照步驟4進(jìn)行清洗。
10. 在孵育緩沖液中以100：1 /孔的比例稀釋1：1000的鏈霉親和素ALP。在室溫下孵育1小時(shí)。
11. 按照步驟4進(jìn)行清洗。
12. 加入100μl/孔的適當(dāng)?shù)孜锶芤?，例如?duì)硝基苯基磷酸酯（pNPP#11619）。
13.  在適當(dāng)時(shí)間的顯影后，在ELISA讀數(shù)器中測(cè)量光密度（對(duì)于pNPP為405 nm）。