Cyber Orange 是一種出色的核酸凝膠染料,與核酸結(jié)合后顯示出較大的熒光增強(qiáng)。它具有與SYBR®Gold相同的光譜特性,因此可以很好地替代SYBR®Gold(SYBR®Gold是Invitrogen的商標(biāo))。它是可用于檢測(cè)瓊脂糖中的DNA的敏感的染色劑之一。Cyber Orange對(duì)DNA的敏感性高于對(duì)RNA的敏感性,非常適合與SYBR Gold儀器設(shè)置相同的激光掃描儀一起使用。Cyber瓊脂糖對(duì)瓊脂糖凝膠中的DNA比溴化乙錠敏感得多,并且在凝膠上可檢測(cè)到低至皮克dsDNA。
產(chǎn)品說明書
樣品實(shí)驗(yàn)方案
溶液配制
工作溶液
Cyber Orange 工作溶液(1X):
通過將10,000X儲(chǔ)備試劑稀釋到pH 7.5-8緩沖液(例如TAE,TBE或TE,pH 8.0)中來制成1X Cyber Orange 工作溶液。 注意: 在水中配制的染色溶液比在緩沖液中配制的溶液不穩(wěn)定,必須在24小時(shí)內(nèi)使用以確保染色敏感性。 注意: 此外,在pH低于7.5或高于8.0的緩沖液中制備的染色溶液穩(wěn)定性較差,并且染色效果降低。
操作步驟
1.染色后方案
1.1根據(jù)您的標(biāo)準(zhǔn)方案運(yùn)行凝膠。
1.2將凝膠放在合適的聚丙烯容器中。輕輕加入足量的1X Cyber Orange 工作溶液以浸沒凝膠。 注意: 請(qǐng)勿使用玻璃容器,因?yàn)樗鼤?huì)吸收染色溶液中的許多染料。
1.3避開光線,在室溫下輕輕攪拌凝膠約30分鐘。 注意: 染色溶液可以在黑暗中(冷藏)保存一周,并可以重復(fù)使用2-3次。
1.4使用長路徑綠色濾光片(例如SYBR®濾光片或GelStar®濾光片),使用254 nm透照器或基于激光的凝膠掃描儀對(duì)染色的凝膠成像。
2.預(yù)染方案
2.1使用標(biāo)準(zhǔn)方案準(zhǔn)備瓊脂糖凝膠溶液。
2.2在凝膠中添加1X Cyber Orange?工作溶液并充分混合。
2.3根據(jù)您的標(biāo)準(zhǔn)方案運(yùn)行凝膠。
2.4使用長路徑綠色濾光片(例如SYBR®濾光片或GelStar®濾光片),使用254 nm透照器或基于激光的凝膠掃描儀對(duì)染色的凝膠成像。
3.電泳前的DNA染色
3.1電泳前,將DNA與染料的1:1000至1:3000稀釋液(在TE,TBE或TAE中)孵育至少15分鐘。
3.2根據(jù)您的標(biāo)準(zhǔn)方案運(yùn)行凝膠。
3.3使用254 nm透照器或使用長距離綠色濾光片(例如SYBR®濾光片或GelStar®濾光片)的基于激光的凝膠掃描儀對(duì)染色的凝膠成像。