Amplite 熒光法通用型蛋白酶活性檢測(cè)試劑盒 綠色熒光
|
貨號(hào)
|
13500
|
存儲(chǔ)條件
|
f/l
|
|
規(guī)格
|
500 Tests
|
價(jià)格
|
|
|
Ex (nm)
|
489
|
Em (nm)
|
515
|
|
分子量
|
|
溶劑
|
|
|
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
|
產(chǎn)品訂購(gòu)：QQ:1485814040
聯(lián)系電話：18691576690
02968064558
簡(jiǎn)要概述
蛋白酶測(cè)定法廣泛用于蛋白酶抑制劑的研究和蛋白酶活性的檢測(cè)。監(jiān)測(cè)各種蛋白酶活性已成為許多生物實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)任務(wù)。 一些蛋白酶已被確定為良好的**開(kāi)發(fā)目標(biāo)。
我們的Amplite 通用熒光蛋白酶活性檢測(cè)試劑盒是進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)分離蛋白酶或鑒定蛋白質(zhì)樣品中污染蛋白酶的理想選擇。該試劑盒使用熒光酪蛋白偶聯(lián)物，其被證明是廣譜蛋白酶（例如胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，嗜熱菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和彈性蛋白酶）的通用底物。在完整的底物中，酪蛋白用綠色熒光染料嚴(yán)重標(biāo)記，導(dǎo)致顯著的熒光猝滅。蛋白酶催化的水解減輕了其猝滅效應(yīng)，產(chǎn)生明亮的熒光染料標(biāo)記的短肽。熒光強(qiáng)度的增加與蛋白酶活性成正比。 該測(cè)定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行，并且易于適應(yīng)自動(dòng)化。使用FITC濾光片組，可以使用熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 490/525 nm下輕松讀取其信號(hào)。
點(diǎn)擊查看光譜
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
方案一：一個(gè)96孔板的測(cè)定方案
以下說(shuō)明書(shū)僅提供指南，實(shí)際應(yīng)根據(jù)您的具體需求進(jìn)行修改。
概述
準(zhǔn)備蛋白酶底物溶液（50μL）
加入底物對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照或測(cè)試樣品（50μL）
孵育0分鐘（用于動(dòng)力學(xué)讀數(shù)）或30分鐘-1小時(shí)（用于終點(diǎn)讀數(shù)）
在Ex / Em = 490 / 525nm處監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度
注意：在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。
操作方法
1.準(zhǔn)備工作解決方案：
1.1制備蛋白酶底物溶液：在2X測(cè)定緩沖液（組分C）中以1：100稀釋蛋白酶底物（組分A）。在96孔板中每次測(cè)定使用50μL蛋白酶底物溶液。
注意：2X分析緩沖液（組分C）設(shè)計(jì)用于檢測(cè)胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，嗜熱菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和人白細(xì)胞彈性蛋白酶的活性。對(duì)于其他蛋白酶，請(qǐng)參閱附錄I了解適當(dāng)?shù)姆治鼍彌_液配方。
1.2胰蛋白酶稀釋：在去離子水中以1:50稀釋胰蛋白酶（5U /μL，組分B），得到濃度為0.1U /μL。
2.根據(jù)說(shuō)明書(shū)中的表1和表2，將步驟1中制備的試劑加入96孔微量培養(yǎng)板中。
3.運(yùn)行酶促反應(yīng)：
3.1將50μL蛋白酶底物溶液（來(lái)自步驟1.1）加入到測(cè)定板中的所有孔中，充分混合試劑。
3.2用Ex / Em = 490 / 525nm的熒光板讀數(shù)器監(jiān)測(cè)熒光增加。
對(duì)于動(dòng)力學(xué)讀數(shù)：立即開(kāi)始連續(xù)測(cè)量熒光強(qiáng)度，每5分鐘記錄數(shù)據(jù)30分鐘。
終點(diǎn)讀數(shù)：將反應(yīng)在所需溫度下孵育30至60分鐘，避光，測(cè)量熒光強(qiáng)度。
方案二：使用純化酶篩選蛋白酶抑制劑
概述
準(zhǔn)備蛋白酶底物溶液（10μL）添加底物對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照，載體對(duì)照或測(cè)試樣品（90μL）
孵育0分鐘（用于動(dòng)力學(xué)讀數(shù)）或30分鐘-1小時(shí)（用于終點(diǎn)讀數(shù)）
監(jiān)測(cè)Ex的熒光強(qiáng)度 / Em = 490 / 525nm
操作方法
1.準(zhǔn)備工作解決方案：
1.1制備1X測(cè)定緩沖液：將5mL去離子水加入5mL 2X測(cè)定緩沖液（組分C）中。
1.2制備蛋白酶底物溶液：在1X測(cè)定緩沖液（來(lái)自步驟1.1）中以1:20稀釋蛋白酶底物（組分A）。使用10μL/孔的蛋白酶底物溶液用于96孔板。
注意：2X測(cè)定緩沖液（組分C）設(shè)計(jì)用于檢測(cè)胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，嗜熱菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和人白細(xì)胞彈性蛋白酶的活性。 對(duì)于其他蛋白酶，請(qǐng)參閱附錄I了解適當(dāng)?shù)姆治鼍彌_液配方。
1.3蛋白酶稀釋：將蛋白酶在1X測(cè)定緩沖液中稀釋至濃度為500-1000nM。每個(gè)孔需要10μL蛋白酶稀釋液。為所有測(cè)試樣品準(zhǔn)備適當(dāng)?shù)牧浚殛?yáng)性對(duì)照和載體對(duì)照孔準(zhǔn)備額外的量。
2.根據(jù)說(shuō)明書(shū)中的表1和表2，將步驟1中制備的試劑加入96孔微量培養(yǎng)板中。
3.運(yùn)行酶促反應(yīng)：
3.1將10μL蛋白酶底物溶液（來(lái)自步驟1.2）加入陽(yáng)性對(duì)照（PC），載體對(duì)照（VC）和測(cè)試樣品（TS）的孔中。 充分混合試劑。
3.2用Ex / Em = 490 / 525nm的熒光板讀數(shù)器監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度。
對(duì)于動(dòng)力學(xué)讀數(shù)：立即開(kāi)始連續(xù)測(cè)量熒光強(qiáng)度，每5分鐘記錄數(shù)據(jù)30分鐘。
終點(diǎn)讀數(shù)：將反應(yīng)在所需溫度下孵育30至60分鐘，避光。 然后測(cè)量熒光強(qiáng)度。