細胞膜熒光探針DIR是一種細胞膜電位敏感的親脂性陰離子熒光染料，DIBAC4(3)本身無熒光，當進人細胞與胞漿內的蛋白質結合后才發(fā)出熒光，DIBAC4(3)進入細胞，細胞內熒光強度增加，即膜電位增加表示細胞去極化；反之，細胞內熒光強度降低即膜電位降低表示細胞超極化。DiBAC4(3)是目前*常用的線粒體膜電位檢測熒光探針。
1. 染色液制備
（1）配置DMSO或EtOH 儲存液：儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。
【注】未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復凍融。
（2）工作液制備：細胞膜熒光探針DIR用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。
【注】工作液*終濃度建議根據不同細胞系和實驗體系來優(yōu)化。
2. 懸浮細胞染色
（1）加入細胞膜熒光探針DIR適當體積的染色工作液重懸細胞，使其密度為1×106/mL。
（2）37 ℃孵育細胞 2～20min，不同的細胞*佳培養(yǎng)時間不同?？梢?0min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記結果。
（3）孵育結束，按1000～1500 rpm離心5min。
（4）傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預熱的生長培養(yǎng)液重懸細胞。
（5）重復（3），（4）步驟兩次以上。
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